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液相色譜儀如何測定色氨酸含量

更新時(shí)間:2013-03-18點(diǎn)擊次數(shù):2311

1、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

   色氨酸樣品,甲醇, 液相色譜儀梯度系統(tǒng),紫外檢測器,手動(dòng)進(jìn)樣閥,色譜工作站,0.03%KH2PO4溶液

2、HPLC色譜分析條件

   流動(dòng)相為0.03%KH2PO4溶液(A)-甲醇(B),線性梯度淋洗,流速1.0mL/min,柱溫 35℃,檢測波長276nm。
流動(dòng)相 時(shí)間(t/min)
 5 10 15 20
A(%) 80 90 80 70
B(%) 20 10 20 30

3、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

   精密稱取色氨酸標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品50mg,置100ml容量瓶中,振搖,用流動(dòng)相溶解到刻度,作為供試品溶液,另取色氨酸樣品適量,同法操作。

4、標(biāo)準(zhǔn)直線的制作

   精密稱取色氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品適量 ,分別稀釋制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液,注入液相色譜儀,以色氨酸峰面積A為縱坐標(biāo),濃度C為橫坐標(biāo),制作回歸標(biāo)準(zhǔn)直線。

5、發(fā)酵液中樣品中色氨酸含量的測定
取發(fā)酵液,稀釋配制成約 500μg/ ml 的溶液,搖勻,過濾,取25μl進(jìn)樣,在液相色譜儀下測量,記錄峰值面積,作圖。



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